Phos-tag SDS-PAGE データ集 FMNL23
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FMNL2

Plays a role in the regulation of cell morphology and cytoskeletal organization. Required in the cortical actin filament dynamics.. Mw; 123,000

FMNL3

Plays a role in the regulation of cell morphology and cytoskeletal organization. Required in the control of cell shape and migration. Required for developmental angiogenesis (By similarity). In this process, required for microtubule reorganization and for efficient endothelial cell elongation. In quiescent endothelial cells, triggers rearrangement of the actin cytoskeleton, but does not alter microtubule alignement.Mw: 117,000

泳動結果

 

細胞骨格系タンパク質であるFMNL2及びFMNL3 は,N末のGlycine 2がミリストイル化されます。 

ミリストイル化に依存してリン酸化されるセリン残基があることを発見しました。

c末にFLAG tagを付け,HEK293細胞で一過性にFMNL2 あるいはFMNL3 を発現させました。

 

ミリストイル化部位であるGlycine 2 をアラニンに置換したG2Aでは,WTと比較して消失したリン酸化バンドがあります。

これはミリストイル化依存的なリン酸化部位が存在することを示しています。 

PhosphositePlusに登録されている,リン酸化サイトをアラニンに置換して(アラニンスキャン ),それらのリン酸化状態をPhos-tag SDS-PAGEで調べたところ,FMNL2は S171 / S1072 が,FMNL3 は S174がミリストイル化依存的なリン酸化部位であることがわかりました。つまり,これらの部位のアラニン変異体が,上記の写真のG2A と同様にリン酸化バンドが消失しました。 



 

 

 

関連画像

  

 

Reference

Emiko Kinoshita-Kikuta, Ayane Tanikawa, Takuro Hosokawa, Aya Kiwado, Koko Moriya, Eiji Kinoshita, Tohru Koike, Toshihiko Utsumi, A strategy to identify protein-N-myristoylation-dependent phosphorylation reactions of cellular proteins by using Phos-tag SDS-PAGE.
PLOS One, 14(11): e0225510. (2019)

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0225510

ゲルの条件

Zn2+–Phos-tag: 20µM

Polyacrylamide: 7.5%(w/v)

検出方法 WB: Anti-FLAG antibody

 


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